Tekućinska kromatografija (ultra) visoke djelotvornosti (HPLC/UHPLC) je oblik kolonske kromatografije koji se često koristi u analitičkoj kemiji. HPLC/UHPLC se koristi za razdvajanje komponenti iz smjese na osnovu kemijskih interakcija između tvari koja se analizira i stacionarne faze u koloni. Princip rada HPLC/UHPLC-a je forsiranje prolaska analizirane smjese kroz kolonu pumpanjem mobilne faze kroz istu. Unosi se mali volumen uzorka u tok mobilne faze i na osnovu specifičnih kemijskih i fizičkih interakcija, dolazi do različitog zadržavanja komponenata smjese. Vrijeme zadržavanja ovisi o prirodi tvari koja se analizira, stacionarne faze i sastava mobilne faze. Kao otapala se koriste voda, metanol, acetonitril i razna druga organska otapala. Kromatografija na normalnim fazama koristi polarnu stacionarnu fazu i nepolarnu mobilnu fazu, a koristi se kada je tvar koja se analizira polarna. Polarna tvar se adsorbira i zadržava na česticama stacionarne faze. Kromatografija na obrnutim fazama (RP-(U)HPLC) koristi nepolarnu stacionarnu fazu i polarnu mobilnu fazu. Najčešća stacionarna faza je silikatna, tretirana sa RMe2SiCl, gdje je R alkilna grupa ravnog lanca kao C18H37 ili C8H17. Vrijeme zadržavanja je duže za manje polarne spojeve. Vrijeme zadržavanja se povećava dodatkom polarnih otapala u mobilnu fazu a smanjuje se dodatkom hidrofobnih otapala. RP-(U)HPLC funkcionira na principu hidrofobnih interakcija, koje su rezultat odbijajućih sila između polarnog otapala i relativno nepolarne tvari koja se analizira i nepolarne stacionarne faze. pH ima utjecaj na brzinu eluiranja zbog mogućnosti promjene polarnosti tvari. Zbog toga se često u mobilnu fazu dodaju puferi. Kolone za RP-(U)HPLC ne bi trebalo koristiti sa jakim bazama zbog mogućnosti razgradnje silikatnih čestica. obrnutafaza.hr/hplc_fortis.html
Posted on: Thu, 22 Aug 2013 06:05:42 +0000
Recently Viewed Topics
© 2015